荧光-网织红细胞分析

HORIBA Medical使用了流式细胞术和阻抗测量技术，同时使用ABX Fluocyte试剂，该试剂使用噻唑橙作为荧光染料，其激发发生在可见区域λ=488nm。它是一种核酸特异型染料，染料通过细胞膜进入细胞内部。当它与RNA结合时，荧光发射增强3000倍。它是NCCLS-CLSI指南推荐的Ret计数染料之一。噻唑橙已成为流式细胞仪检测网织红细胞常用的染料。

网织红细胞的荧光强度与RNA含量和未成熟度呈正比。

当细胞染色完成后，将悬浮液转移到激光光具座上进行测量。对于测量每个通过流通池的细胞的荧光信号，以及通过阻抗测量每个细胞的体积。每个细胞均有两个值：

• 电阻抗测量细胞的电压与细胞的尺寸
• 正交荧光（OFL）：利用聚焦于光学通道并位于激光束90ﾟ位置的一组透镜和专门针对仅选择荧光波长的噻唑橙染色的干涉滤波器以及雪崩光电二极管检测得出的荧光强度。

网织红细胞矩阵产生自两次测量：分别根据X轴和Y轴测得的细胞的电阻率体积（CIS）和正交荧光（OFL）。无RNA的成熟红细胞显示较低或无荧光信号，它们位于该矩阵的底部，水平方向的分布与MCV和RDW相关。分别在X轴和Y轴上测量细胞的电阻率体积（CIS）和正交荧光（OFL），生成网织红细胞的基质。成熟的RBC不含RNA，所有没有荧光信号或者荧光信号很低。它们位于散点图的底部，水平方向的分布与MCV和RDW相关。网织红细胞的荧光强度与RNA含量和未成熟度呈正比，因此可以分开红细胞和网织红细胞。最大荧光强度的细胞通常是未成熟细胞，位于散点图最上端，此区域内也能发现有核红细胞。